抑制端粒酶活性对胶质瘤细胞增殖和凋亡影响作用机制的研究

天津医科大学博士研究生论文

抑制端粒酶活性对胶质瘤细胞增殖及凋亡影响

作用机制的研究

中文摘要

【目的】

观察端粒酶特异性抑制剂叠氮胸苷(3"azido?2"3'-dideoxythymidine,AZT)对人TJ905胶质母细胞瘤细胞系(TJ905细胞)端粒酶活性的抑制作用,以及抑制端粒酶活性后对TJ905细胞增殖和凋亡的影响。检测抑制端粒酶活性能否上调TJ905细胞抑癌基因生长抑制因子1(Ihibitorofgrowth1,INGI)的表达,分析TJ905细胞的INGl基因表达变化与其增殖活性和凋亡程度的相互关系。旨在探讨抑制端粒酶活性后对恶性胶质瘤细胞增殖和凋亡影响的下游作用机制;了解INGl基因编码产物p33‘NGl6在该机制中的作用和作用地位;评价AZT治疗恶性胶质瘤的效果和应用前景。最终目的是进一步加深对恶性胶质瘤发生、发展机制的认识,为以端粒酶为靶点进行恶性胶质瘤化学药物靶向治疗的可行性提供客观的实验依据。

【方法】

将TJ905细胞按1~5×105/ml接种于75cm2培养瓶中培养至对数生长期,随机分为四组:对照组、AZT509M组、AZT100“M组、AZT200pM组。常规传代培养,取第一、三、六代进行以下检测:以端粒重复扩增法(telomericrepeatamplificationproteocol,TRAP)检测经不同浓度AZT作用后TJ905细胞端粒酶活性的变化;以细胞集落形成实验评价AZT对TJ905细胞增殖活性及生长速度的影响;通过磁.67和GFAP表达的免疫细胞化学检测,观察AZT抑制TJ905细胞增殖和诱导其衰老凋亡的作用;以流式细胞术(FCM)、单细胞凝胶电泳分析法(singlecellgelelectrophoresisassay,SCGE)和TUNEL法,检测不同浓度AZT对TJ905细胞凋亡和细胞周期的影响;采用逆转录PCR(reversetranscriptPCR,RT-PCR)方法检测用不同浓度AZT作用后,TJ905细胞p331N01bmRNA

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